人呼吸道合胞病毒核蛋白、磷蛋白和M2-1蛋白的表达及鉴定

摘要：

目的 构建含有人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,hRSV)核蛋白(nucleoprotein,N)、磷蛋白(phosphoprotein,P)和转录延长/终止抑制因子(transcription elongation/antitermination factor M2-1,M2-1)蛋白编码基因的表达载体,并转染BSRT7/5细胞,鉴定蛋白的表达.方法 根据hRSV兰州株(LZ01/09)的N、P和M2-1基因序列设计3对特异性引物,以pcDNA-N、pcDNA-P和pcDNA-M2-1质粒为模板,PCR扩增N、P和M2-1基因片段,与pGEM-T载体连接,构建亚克隆载体;再通过体外酶切连接将内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)序列克隆至pRSV7载体T7启动子表达盒基因的上游,构建基本表达载体p7IK;通过酶切连接构建表达载体p7IK-N、p7IK-P和p7IK-M2-1,转染BSR T7/5细胞,采用Western blot法鉴定蛋白的表达.结果 亚克隆载体、基本表达载体和表达载体经酶切及测序验证均构建正确;Western blot可检测到N、P和M2-1蛋白的特异性条带.结论 成功构建了含有N、P和M2-1编码基因的表达载体,经BSR T7/5细胞鉴定3种蛋白成功表达,为进一步应用反向遗传学技术拯救RSV及研发RSV减毒活疫苗奠定了基础.

关键词：呼吸道合胞病毒、核蛋白、磷蛋白、M2-1蛋白、蛋白表达

所属期刊栏目：32

分类号：R373.9;Q786(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2019-12-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1216-1221