牛对氧磷酶-1蛋白多克隆抗体的制备及其双抗夹心ELISA检测方法的建立
目的 制备牛对氧磷酶-1 (paraoxonase-1,PON-1)蛋白多克隆抗体,并建立PON-1的双抗夹心ELISA检测方法.方法 将重组牛PON-1蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体,经AKTA蛋白纯化系统纯化抗体.以获得的多克隆抗体为捕获抗体,牛PON-1单克隆抗体为检测抗体,HRP标记的山羊抗小鼠IgG为二抗,构建牛PON-1蛋白的双抗夹心ELISA检测法,并对多克隆抗体(1∶100、1∶200、1∶400、1∶800、1∶1600、1∶3200、1∶6400、1∶12 800)及单克隆抗体浓度(0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4 mg/mL)、包被条件(37℃孵育2h、4℃孵育过夜)、封闭液(1％脱脂奶粉、5％脱脂奶粉、0.5 mol/L氯化铵)、封闭条件(37℃2h、37℃ 4h、4℃过夜)进行优化,同时验证方法的线性及准确度.采用该方法及市售试剂盒同时检测酮病组及对照组奶牛血清中的PON-1含量.结果 建立的双抗夹心ELISA法最适检测条件为:单克隆抗体浓度为3.2 mg/mL,多克隆抗体工作浓度为1∶800稀释,封闭液为5％脱脂奶粉,包被及封闭条件均为4℃过夜.牛PON-1蛋白标准品浓度在90～3 125 ng/mL浓度范围内,与A450值呈良好的线性关系,标准曲线方程为y=0.6186x-0.753 6,R2=0.981 3;5份样品检测结果均值为764.21 ng/mL,回收率为97.97％.市售试剂盒和本实验建立方法检测酮病组奶牛体内PON-1含量均显著低于对照组(P＜0.001).结论 成功获得了抗牛PON-1蛋白的多克隆抗体,并建立了牛PON-1蛋白的双抗夹心ELISA检测方法,且该方法具有良好的线性及准确度.
对氧磷酶-1蛋白、牛、多克隆抗体、双抗夹心ELISA法
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S856(动物医学（兽医学）)
国家自然科学基金;奶牛重要群发生产性疾病群防群控技术及产品研发与示范;畜禽群发普通病防控技术研究
2019-11-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
1126-1130,1137
