人源细胞间黏附分子-1基因SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立、验证及应用
目的 建立并验证细胞间黏附分子-1 (intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)基因的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法,并用该方法检测不同细胞中ICAM-1的基因水平.方法 根据GenBank中登录的ICAM-1基因序列设计并合成引物,建立ICAM-1基因的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR法,验证方法的适用性、线性范围、灵敏性、特异性及精密性.同时采用该方法对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)、人星形神经胶质瘤细胞(u251)、人原发性肝癌细胞(PLC/PRF/5)、人胚肾细胞(HEK293)及人脐静脉内皮细胞(HuvEc)进行检测.结果 该方法的溶解曲线峰单一,无非特异性产物和引物二聚体;标准质粒在6.74×104~6.74×109 copies/μL浓度范围内与D值呈良好的线性关系,线性方程为)y=-3.576 logx+42.982,R2=1.000;建立方法的灵敏性是普通PCR法的10倍;该方法检测不同物种细胞无交叉反应,仅能检出人源细胞ICAM-1;批内和批间CV均<1%.不同组织来源的细胞内ICAM-1基因含量不同,其中MRC-5细胞含量最高.结论 成功建立了ICAM-1基因的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法,且具有良好的特异性、灵敏性及精密性,可用于ICAM-1基因的定量检测.
细胞间黏附分子-1、SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR法、人源细胞
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Q789(基因工程(遗传工程))
国家自然科学基金项目31460665;教育部“长江学者和创新团队发展计划”项目IRT_17R88;西北民族大学中央高校基本科研业务费资金项目31920190085
2019-11-20(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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1115-1120