鲎血G因子的原核表达

摘要：

目的 在大肠埃希菌中表达重组鲎血G因子,并检测其酶活性.方法 根据大肠埃希菌偏好性优化G因子成熟肽编码序列,将G因子α亚基及β亚基克隆至原核表达载体pET32a-sumo上,分别构建pET32a-sumo/factorG-α及pET32a-sumo/factorG-β原核表达质粒,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达;产物经Ni-NTA亲和层析,SUMO蛋白酶切割融合伴侣,获得重组目的蛋白factorG-α及factorG-β;将二者等摩尔质量重组获得复合物G,荧光底物Boc-Glu-(OBzl)-Gly-Arg-MCA检测其酶活性.结果 经PCR及测序鉴定,重组质粒pET32a-sumo/factorG-α及pET32a-sumo/factorG-β构建正确;表达蛋白均以包涵体的形式存在沉淀中,表达量占菌体总蛋白的30％及45％;纯化的factorG-α及factorG-β蛋白相对分子质量约为74 000和31 000,每1 LLB培养基酶切回收蛋白分别为0.7和1.7 mg.factorG-α及factorG-β蛋白与荧光底物几乎不反应,而复合物G可与荧光底物反应产生较高的荧光强度.结论 成功表达了具有酶活性的鲎血G因子,为进一步探讨鲎血G因子的生物学功能及新型真菌感染检测试剂盒开发奠定了基础.

关键词：鲎血G因子、原核表达、酶活性

所属期刊栏目：32

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2019-10-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：996-1000