枯草芽孢杆菌Expansin蛋白的原核表达及活性分析
目的 原核表达枯草芽孢杆菌Expansin蛋白,并分析其促进多糖糖化的活性.方法 以过夜培养的Bacillussubtilis subsp.Subtilis subtilis str.168基因组为模板合成expansin基因;在引物的N-端添加6-his tag,PCR合成融合基因6his-expansin构建重组质粒6his-expansin-6his-pET28a(+)[heh-pET28a(+)],转化大肠埃希菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达融合蛋白6His-Expansin-6His(HEH);并对表达条件进行优化.产物经Ni-NTA纯化,检测其与多糖降解酶(polysaccharide degrading enzyme,PDE)(纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶)及多糖复合酶(polysaccharide complexenzyme,PCE)制剂的协同活性(synergistic activity,SA).结果 经双酶切鉴定,重组质粒heh-pET28a(+)构建正确;融合蛋白HEH在0.05 mmol/L IPTG 30℃诱导30 h的最适表达条件下,表达量约为1.2 mg/mL,其相对分子质量为26 400,目的蛋白纯度达95％;该蛋白与纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶的SA分别为171.53％、61.95％、230.00％,与PCE降解滤纸(filter paper)、秸秆(rice straw)的SA分别为312.83％、356.59％.结论 重组的融合蛋白HEH与PDE均具有较高的协同作用,为Expansin在生物质木质纤维素糖化领域的应用奠定了基础.
枯草芽孢杆菌、Expansin、原核细胞、基因表达、多糖糖化、协同活性
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Q819;Q816(生物工程学(生物技术))
国家自然科学基金41773103;江苏省盐土生物资源研究重点实验室开放基金JKLBS2017012
2019-10-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
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