胰高血糖素样肽-1融合蛋白生物学活性检测方法的建立及验证

摘要：

目的 建立胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)融合蛋白(GLP1-Fc)生物学活性荧光素酶报告基因测定方法,并进行验证.方法 采用电穿孔法将GLP-1受体(GLP-1R)表达载体和cAMP反应元件(cAMPresponse element,CRE)报告基因共转染入HEK-293细胞中,通过加入潮霉素B筛选和单克隆培养,获得稳定转染的单克隆细胞株;采用药物敏感的细胞株建立报告基因生物学活性测定方法,并对方法进行优化及验证.结果 筛选出GLP-1-Fc活性检测细胞株293-GLP-1R/CRE,该细胞较合适的活性检测参数为每孔接种20 000个细胞,培养10～15 h,利拉鲁肽的起始浓度为10 mg/L,作用时间5h.采用建立的方法检测不同效价利拉鲁肽样品相对生物学活性的回收率在(90.43±3.29)％～(99.87±5.34)％之间,利拉鲁肽(标准品)与样品6次测定的EC50的CV值分别为2％和3％,二者无差异.结论 建立了快速、精确的测定GLP1-Fc生物学活性的方法,为GLP-1相关的药效指标评价提供了更加客观、全面的手段.

关键词：胰高血糖素样肽-1融合蛋白、受体、荧光素酶报告基因、生物学活性

所属期刊栏目：32

分类号：R392-33

在线出版日期：2019-09-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：904-908,914