减少重组蛋白TP25在Protein L层析中形成多聚体方法的建立

摘要：

目的 建立减少重组蛋白TP25在Protein L层析中形成多聚体的方法.方法 通过在Protein L层析纯化重组蛋白TP25使用的洗脱缓冲液中添加半胱氨酸(L-cysteine,Cys)等保护剂,并采用碱性溶液中和洗脱液的方法优化多聚体去除条件,经非还原SDS-PAGE检测纯化过程中目的蛋白多聚体的变化情况,葡聚糖凝胶Sephadex G25层析去除洗脱液中Cys.结果 去除Protein L层析形成多聚体的最适条件为:用含Cys终浓度为100 mmol/L的20 mmol/L柠檬酸溶液进行直接洗脱,并经0.5 mmol/L的NaOH溶液中和.该条件下纯化的目的蛋白纯度可达95％以上,且多聚体含量大幅减少.葡聚糖凝胶Sephadex G25可有效去除半胱氨酸.结论 在洗脱液中添加Cys可有效减少重组蛋白TP25在Protein L层析纯化过程中多聚体的形成.

关键词：重组蛋白、Protein L层析、L-半胱氨酸、多聚体

所属期刊栏目：32

分类号：TQ460.6+4

资助基金：山东省重点研发计划2016GSF201188;山东省医药卫生科技发展计划2017WS275

在线出版日期：2019-08-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：794-797,802