人可溶性CD105蛋白的真核表达及纯化
目的 建立一种简便、高效的人可溶性CD105(soluble CD105,sCD105)蛋白的真核表达及纯化方法.方法 人工合成胞外区和信号肽区域的DNA片段,在其信号肽前端加入Kozak sequence (GCACCATGG)序列,促进蛋白表达,同时在其C-末端6×His前加入K(AAG)氨基酸,促进6×His的暴露有助于后期纯化,构建真核表达质粒pcDNA3.4-sCD105.通过瞬时转染的方法将重组质粒转染293F悬浮细胞,收集细胞上清液,利用His-trap EXCEL柱通过两步纯化法进行纯化.将纯化获得的sCD105蛋白超滤浓缩后,进行10% SDS-PAGE、Western blot及ELISA检测.结果 在20 mL(1×106个/mL)293F悬浮细胞中表达及纯化后,获得纯度>95%的sCD105蛋白3 mL,浓度为27.83 mg/L,获得率高达4.17 mg/L.结论 成功建立了一种简便高效的sCD105蛋白表达及纯化的方法,为后期蛋白功能的研究及相应治疗或诊断性抗体的开发奠定了基础.
人可溶性CD105蛋白、真核表达、纯化
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R392.12
国家自然科学基金5167070727;重庆市农发资金资助项目17406
2019-08-26(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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