长效重组人生长激素纯化液中CHO-K1细胞残留DNA实时荧光定量PCR检测方法的建立及验证
目的 建立检测CHO-K1细胞表达长效重组人生长激素(Fc-recombinant human growth hormone,Fc-rhGH)纯化液中残留DNA的实时荧光定量PCR方法,并进行验证.方法 提取CHO-K1细胞基因组DNA,特异性PCR扩增后,克隆至pMD18-T载体,构建重组质粒,以其为标准品,建立实时荧光定量PCR检测方法;并对方法进行灵敏度、线性、准确度、精密度、特异性及耐用性验证.结果 建立的方法灵敏度可达2.6×101 copies/μL.标准曲线的回归方程为y=-3.487x+30.201,R2=0.999;检测样品中DNA回收率在73.56％～ 101.87％范围内,RSD均小于10％;该方法可特异性扩增CHO-K1细胞的基因组DNA,而Vero细胞、MDCK细胞、Wish细胞及大肠埃希菌等基因组DNA均未见明显的扩增;样品精密度测定Ct的RSD在0.4％ ～2.95％之间;于两种不同PCR仪器上检测标准品,扩增效率分别为98％、99％,相关系数R2均为0.999.结论 成功建立了一种检测CHO-K1细胞表达Fc-rhGH纯化液的残留DNA的实时荧光定量PCR方法,该方法具有较好的灵敏度、线性、准确度、精密度、特异性和耐用性.
实时荧光定量PCR、重组人生长激素、CHO-K1细胞、残留DNA
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R977.1(药品)
吉林省科技发展计划项目,重点科技攻关项目20160204034YY
2019-07-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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