寨卡病毒E蛋白第三结构域的可溶性表达及多克隆抗体的制备

摘要：

目的 原核表达并纯化寨卡病毒(Zika virus)E蛋白第三结构域(ZK-EⅢ)重组蛋白,并制备其多克隆抗体.方法 PCR扩增ZK-EⅢ序列,经双酶切后将其插入原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组表达质粒pET-ZKEⅢ,转化至大肠埃希菌(E.coli)Rosetta2(DE3),经IPTG诱导,表达的重组蛋白经亲和层析和阴离子交换层析纯化后,免疫家兔,制备ZK-EⅢ多克隆抗血清,进行Western blot鉴定后,ELISA法检测该抗血清效价.结果 经PCR及测序鉴定证明原核表达质粒pET-ZKEⅢ构建正确,表达的重组蛋白相对分子质量约31 000,主要以可溶性形式存在,表达量占菌体总蛋白的60％;用纯化的重组蛋白免疫家兔后,获得的血清特异性良好,血清效价为1∶51 200.结论 ZK-EⅢ蛋白在E.coli中以可溶性形式表达,制备的抗血清特异性好,效价高,具有用于寨卡病毒诊断和进行重组亚单位疫苗开发的潜力.

关键词：寨卡病毒、E蛋白Ⅲ区、原核表达、多克隆抗体

所属期刊栏目：32

分类号：R183.5+1;Q511(流行病学与防疫)

资助基金：国家高技术研究发展计划2012AA02A401;重大新药创制科技重大专项课题号2018ZX09201006

在线出版日期：2019-07-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：668-672