黑腹果蝇保幼激素受体Met泛素化修饰位点预测及功能验证
目的 预测黑腹果蝇保幼激素(juvenile hormone,JH)受体Methoprene tolerant(Met)的泛素化修饰位点,并验证其功能.方法 利用UbPred和CKSAAP_UbSite在线预测工具对Met的泛素化位点进行预测;通过重叠PCR技术将预测的各泛素化修饰位点赖氨酸分别突变为丙氨酸,同时将第46和526位赖氨酸突变为丙氨酸;将突变后的Met插入至表达载体pAc5.1/V5-His B中,构建各位点突变的表达质粒;转染果蝇Kc细胞,并经格尔德霉素(gelda-namycin,GA)处理,Western blot法检测各位点突变后Met的表达.结果 根据UbPred和CKSAAP_UbSite在线网站预测结果,选取7个赖氨酸位点作为Met的潜在泛素化修饰位点,CKSAAP_UbSite及UbPred预测分值最高的分别为第46和526位赖氨酸.构建的Met各位点突变表达质粒转染果蝇Kc细胞后,于相对分子质量约82 000处均可见Met目的蛋白的表达,经GA处理后,Met表达下降.结论 成功构建了Met的7个预测泛素化修饰位点的单突变表达质粒及1个双突变表达质粒,这些位点的突变均不足以抑制GA诱导Met的降解.
黑腹果蝇、保幼激素、Met、泛素化修饰位点、点突变
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Q591.2
黑龙江省大学生创新创业训练计划项目201710223018;国家自然科学基金项目31501899;黑龙江省自然科学基金项目C2016040;中国博士后基金2016M591558
2019-07-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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