23F型肺炎链球菌多糖蛋白结合物游离蛋白含量检测方法的建立及验证
目的 建立一种检测23F型肺炎链球菌多糖结合物游离蛋白含量的方法,并进行方法学验证.方法 采用体积排阻高效液相色谱(size exclusion chromatography and high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)法检测23F型肺炎链球菌多糖结合物游离蛋白含量.色谱柱:TSKgel G3000(300 mm×78 mm,5μm);流动相:10 mmol/LPBS(150 mmol/L NaCI,pH 6.8);检测波长:214 nm;流速:0.5 mL/min;柱温:25℃;自动进样:100 μL.同时对该方法进行线性、精密度、准确度、耐用性及专属性验证.结果 建立的方法在纯化载体蛋白破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)含量为3～18 μg/mL时,与峰面积呈良好的线性关系,线性相关系数(R2)＞0.99;23F-2017001、23F-2017002、23F-2017003批供试品重复性相对标准偏差(RSD分别为0.1％、0.3％、1.0％,中间精密性RSD分别为3.7％、8.5％、4.8％;加入6、8、10 μg/mL纯化载体蛋白TT样品的3次检测结果回收率在93.2％～102.6％之间,回收率的RSD均为0.6％;进样温度为20～30℃条件下的保留时间和峰面积相对偏倚在-0.1％～0.5％之间;流动相溶液中含甘氨酸及低浓度硼酸时对检测结果无干扰,硼酸浓度为20 mmol/L以上时对游离蛋白峰检测有一定干扰.结论 本实验建立的方法具有良好的线性、精密性、准确性、耐用性及专属性,可用于23F型肺炎链球菌多糖结合物游离蛋白含量检测.
肺炎链球菌、多糖蛋白结合物、游离蛋白、体积排阻高效液相色谱
32
O657.7(分析化学)
2019-06-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共5页
579-583
