重组蓖麻毒素A链的表达及半乳糖修饰

摘要：

目的 表达重组蓖麻毒素A链(ricin toxin A,RTA),并进行半乳糖糖基化修饰.方法 将重组质粒pET-28a-RTA转化E coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组蛋白RTA,通过镍离子亲和层析柱纯化包涵体,并复性.采用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐[1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride,EDC]/N,N-羟基琥珀酰亚胺(N-hydroxysuccinimide,NHS)法对重组RTA进行半乳糖糖基化修饰,并对偶联反应温度(20、25、30和37℃)和半乳糖与RTA的投料比(100∶1、500∶1、1 000∶1、1500∶1和2000∶1)进行优化.结果 RTA蛋白相对分子质量约34 000,主要以包涵体形式表达,纯化复性后纯度大于90％.最适偶联反应温度为25℃,半乳糖与RTA最适投料比为1 000∶1.结论 成功表达了RTA蛋白,并通过EDC/NHS法实现了半乳糖与RTA的偶联.

关键词：蓖麻毒素A链、糖基化修饰、工艺优化

所属期刊栏目：32

分类号：Q816(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金面上项目81773630;吉林省科技厅重点科技攻关计划20180201004YY

在线出版日期：2019-06-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：565-569