测定含甘油牛血清白蛋白样品Lowry法的优化及验证
目的 优化《中国药典》三部(2015版)通则50中Lowry法2试验条件,进一步提高检测结果的准确性,并进行方法学验证,为柱纯化组分百日咳疫苗中间品蛋白准确定量提供参考.方法 用Lowry法2测定经脱氧胆酸钠-三氯乙酸预处理的不同浓度且含50％甘油的牛血清白蛋白,使福林酚反应在20℃水浴条件下分别静置30、40和50 min,筛选出蛋白含量测定值相对误差最小的反应时间;再在10、20和30℃条件下,筛选出相对误差最小的反应温度.对该方法进行精密度、准确度、专属性验证,并确定线性范围.结果 福林酚反应温度为30℃、反应时间为30 min时,测定值的平均相对误差最低,与其他试验条件的差异有统计学意义(P＜0.05).在该试验条件下,同一工作日不同试验人员间及同一试验人员不同工作日检测结果的RSD均小于2.00％,重复性检测结果RSD为0.50％,精密度良好;30、50和70 μg/mL蛋白溶液测定值的RSD均小于2.00％,回收率在99％～ 102％之间,可对蛋白准确定量;含甘油50 μg/mL蛋白溶液的回收率及其RSD分别为102％和0.50％;不含甘油对照组回收率和RSD分别为100％和0.82％,专属性良好;在0～140 μg/mL标准范围内,检测含甘油样品的测定范围在15～140 μg.结论 采用Lowry法2测定含高浓度甘油的蛋白样品时,福林酚反应温度、反应时间是影响试验结果的重要因素.30℃条件下反应30 min,可提高测定结果的准确性,符合且更有利于柱纯化组分百日咳疫苗中间品的蛋白定量的要求.
Lowry法、牛血清白蛋白、定量、甘油、优化
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O656.33(分析化学)
2019-05-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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