牛乳中蜡样芽孢杆菌荧光定量PCR检测方法的建立及验证

摘要：

目的 建立一种快速检测牛乳中蜡样芽孢杆菌的荧光定量PCR方法,并进行验证.方法 根据GenBank中登录的蜡样芽孢杆菌gyrB基因序列及荧光定量PCR要求,设计合适的特异性引物,提取菌体DNA,对目的基因进行扩增及克隆;以重组质粒为模板进行荧光定量PCR扩增,绘制标准曲线;以蜡样芽孢杆菌DNA为模板进行荧光定量PCR扩增,确定其扩增条件.对建立的方法 进行特异性及灵敏性验证.结果 建立的方法 检测其他3种牛乳中常见致病菌(大肠埃希菌、志贺菌、沙门菌)未见特异性扩增,即无交叉反应;最低检出限为1×10-7 ng/μL.以掺人蜡样芽孢杆菌的牛乳为样品,可检测到牛乳中10.4 CFU/mL的蜡样芽孢杆菌,优于国标方法(GB 4789.14-2014)检测含有相同菌落数的蜡样芽孢杆菌(仅能检测到1.04× 102CFU/mL).结论 建立的方法 特异性强,灵敏性高,适用于快速、准确检测牛乳中的蜡样芽孢杆菌,为实验室快速检测致病菌提供了参考.

关键词：荧光定量PCR、蜡样芽孢杆菌、gyrB基因

所属期刊栏目：32

分类号：Q789(基因工程（遗传工程）)

资助基金：大庆市指导性科技计划项目zd-2016-147

在线出版日期：2019-04-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：324-327,332