铜绿假单胞菌RhlR抗血清制备

摘要：

目的 在原核系统中表达铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)PAO1的调控蛋白RhlR,制备兔抗RhlR抗血清.方法 构建重组表达载体pGEX-4T-1-rhlR和pET-22b-rhlR并转化至大肠埃希菌BL21感受态细胞中,IPTG诱导表达GST-RhlR和His-RhlR蛋白,经GST或Ni2+亲和层析纯化重组蛋白.将His-RhlR蛋白免疫新西兰大白兔,制备RhlR抗血清,GST-RhlR蛋白包被ELISA板,检测效价.结果 构建的表达载体pGEX-4T-1-rhlR和pET-22b-rhlR经双酶切及测序鉴定证明构建正确;构建的工程菌表达的目的蛋白His-RhlR和GST-RhlR相对分子质量分别为29 000和54 000,表达量均约占菌体总蛋白的85％,纯度大于90％.制备的RhlR抗血清效价可达1∶80000.结论 获得高效价的RhlR抗血清,为PA中rhl调控系统的研究奠定基础.

关键词：铜绿假单胞菌、原核表达、RhlR、抗血清

所属期刊栏目：32

分类号：R378.99;R392-33(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：陕西省科学院应用基础研究项目2014K-06

在线出版日期：2019-03-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：72-75