树鼩干细胞生长因子的原核表达、纯化及免疫原性

摘要：

目的 原核表达、纯化树鼩干细胞生长因子(stem cell factor,SCF),并检测其免疫原性.方法 根据GenBank预测的树鼩SCF基因序列设计引物,PCR扩增SCF基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,构建重组表达质粒pET-30a(+)-SCF,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达的融合蛋白经Ni柱纯化后,免疫家兔,Western blot和ELISA法检测其免疫原性,并检测SCF在树鼩不同组织中的分布情况.结果 重组表达质粒pET-30a(+)-SCF经酶切及测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为34 500,表达量约占菌体总蛋白的35.6％,以包涵体形式存在;纯化后的重组蛋白纯度达90％以上,可与兔抗人SCF多克隆抗体特异性结合,且免疫原性良好,抗血清效价为1∶256 000.在鼻、气管、肺、脾、肾、食管中能检测到SCF的分布.结论 在大肠埃希菌中高效表达了重组SCF蛋白,纯化复性后具有良好的免疫原性.

关键词：树鼩、干细胞生长因子、原核表达、纯化、免疫原性

所属期刊栏目：32

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：北京协和医学院协和青年基金资助3332015147;云南省重点新产品开发计划2015BC010

在线出版日期：2019-03-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：20-24,28