检测重组人源抗人肿瘤坏死因子单克隆抗体甲氨蝶呤残留量的反相高效液相色谱法的建立及验证
目的 建立重组人源抗人肿瘤坏死因子单克隆抗体中甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)残留量检测甲反相高效液相色谱(reversed-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)法,并进行验证.方法 样品经饱和硫酸铵法沉淀蛋白,取上清液进样检测.色谱柱为Waters/ACQUITY UPLC BEH C18(1.7 μm,2.1 mm× 1OOmm),流动相为乙腈-甲醇-0.054 mol/L磷酸二氢钾缓冲液(体积比6∶2∶92),pH6.5,检测波长302 nm,柱温:30℃,流速:0.25 mL/min,进样体积:10 μL,洗脱时间:15 min.同时验证方法的线性、特异性、准确度、定量限、精密性及耐用性.结果 该方法特异性良好;MTX浓度在4～ 200 ng/ mL范围内线性良好,R2＞0.999;检测限为4 ng/mL;MTX浓度为20.0、50.0、100.0 ng/mL 3个加标样品的回收率分别为102.83％、100.33％、99.23％,3次重复检测结果RSD分别为1.56％、1.50％、0.42％,两位实验员6次检测结果的RSD分别为2.46％、1.27％、1.49％;MTX浓度为50.0 ng/mL的加标样品在流动相pH6.3、6.5、6.7条件下测定结果的RSD为2.02％.结论 本实验建立的方法具有良好的特异性、精密性及准确度,且操作简便,可用于重组蛋白药物研发及生产过程中残留MTX的监测.
甲氨蝶呤、人肿瘤坏死因子、单克隆抗体、反相高效液相色谱
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O657.7+2(分析化学)
国家重大新药创制SQ2017ZX090306005
2019-01-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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