双特异纳米抗体的融合表达、纯化及活性分析
目的 融合蛋白表达癌胚抗原(carcinoembroynic antigen,CEA)/CD16双特异纳米抗体,并对其进行纯化及鉴定.方法 将CEA/CD16基因克隆至pGEX4T1载体,构建重组表达质粒,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达.表达蛋白GST-CEA/CD16经GST亲和层析分离纯化、TEV酶切及Ni-NTA和Q-Sepharose FF纯化,获得目的蛋白,并对目的蛋白进行活性分析.结果 重组表达质粒经双酶切及测序鉴定,证明构建正确.表达的融合蛋白相对分子质量约为58 000,主要以可溶性形式存在于菌体裂解上清中.融合蛋白经纯化后获得目的蛋白产率为5 mg/L,并具有介导NK细胞杀伤CEA阳性细胞的能力,且呈剂量依赖性.结论 成功表达了GST-CEA/CD16融合蛋白,纯化后表达产率较高,且具有较好的生物学活性,表明GST融合表达方式应用于双特异抗体具有可行性.
双特异纳米抗体、表达、纯化、GST融合、活性、CEA细胞
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R392-33
广东省科技计划项目2016A050502064
2019-01-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共5页
1322-1325,1332
