呼吸道合胞病毒TaqMan(R)实时定量RT-PCR检测方法的建立

摘要：

目的 建立呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)的TaqMan(R)实时定量RT-PCR检测方法.方法 根据GenBank中RSV相关序列,以A、B亚型毒株基因组保守区域设计并合成RSV特异性引物和探针,采用体外转录RNA标准品,建立TaqMan(R)实时定量RT-PCR方法,同时验证方法特异性、检测范围、灵敏度和精密度.采用建立的方法检测50份下呼吸道感染患儿的痰样品.结果 RNA标准品建立的标准曲线R2＞0.99,扩增效率在90％～110％之间.建立的方法可特异性扩增RSV Long株和RSV A2株核酸样本,IFA和HPIV-3核酸样本均无扩增;最高可检测到1.3×109 copies/μL的RNA标准品,最低可检测到单拷贝的RNA标准品;4名实验员检测同一样品Ct值的试验内CV小于1.72％,试验间的CV在2.44％～3.39％之间.50份下呼吸道感染患儿痰样品中,24份为RSV阳性,阳性率为48％.结论 成功建立了RSV的TaqMan(R)实时定量RT-PCR方法,且该方法快速、特异、灵敏,可用于临床样本中RSV的有效检测.

关键词：TaqMan(R)实时定量RT-PCR、呼吸道合胞病毒、体外转录、RNA标准品

所属期刊栏目：31

分类号：R373.1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2018-12-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1257-1261,1267