分子伴侣共表达对牛成纤维细胞生长因子-2在大肠埃希菌中表达水平和生物活性的影响

摘要：

目的 研究分子伴侣共表达对重组牛成纤维细胞生长因子-2(recombinant bovine fibroblast growth factor-2,rbFGF-2)表达水平及生物活性的影响.方法 根据大肠埃希菌密码子使用偏好性,设计合成rbFGF-2核苷酸序列全长,构建表达rbFGF-2的载体pET-15b-rbFGF-2.将编码伴侣蛋白GroES-GroEL的质粒pGro7和载体pET-15b-rbFGF-2先后转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中进行共表达.表达产物进行Western blot鉴定,经Ni-Agarose亲和层析纯化后,MTS法测定其生物学活性.结果 酶切鉴定和测序结果证实,rbFGF-2基因序列与设计序列相同,且在Nde I和BamH I位点连入表达载体.表达的rbFGF-2蛋白相对分子质量约21 000,主要以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的37.8％,可与牛FGF-2单克隆抗体特异性结合;纯化后,SDS-PAGE检测其纯度超过95％.含有共表达系统的大肠埃希菌中rbFGF-2蛋白表达量为仅含表达载体的大肠埃希菌的2.28倍.在6.25 ng/ml浓度时,rbFGF-2蛋白具有显著的促细胞增殖作用.结论 分子伴侣GroES-GroEL共表达能够显著提高rbFGF-2蛋白的表达水平及其生物活性.

关键词：分子伴侣、成纤维细胞生长因子-2、大肠埃希菌、表达水平、生物学活性

所属期刊栏目：31

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：沈阳市科技创新专项资金-生物与制药科技攻关专项F14-157-9-00

在线出版日期：2018-11-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1095-1098,1103