重组人表皮生长因子生物活性检测方法的建立及与其他显色方法的比较
目的 建立重组人表皮生长因子(recombinant human epidermal growth factor,rhEGF)生物学活性的检测方法,并与其他4种常见显色方法进行比较.方法 参考《中国药典》三部(2015版)附录3528中3T3细胞/MTT显色法,建立rhEGF生物学活性的检测方法,去除细胞饥饿的步骤,并用10％ SDS代替DMSO,同时对培养3T3细胞的PRIM 1640培养液的胎牛血清浓度(0、2％、5％、10％)进行优化.采用优化方法及药典方法同时检测rhEGF标准品,对灵敏度、信噪比、线性及孔间变异度进行比较.分别采用优化方法、MTS显色法、CCK-8显色法、结晶紫显色法、CellTiter-Glo显色法检测同批rhEGF供试品,比较各方法的检测结果.结果 优化方法的灵敏度(半数有效浓度为2.84 IU/mL)、信噪比(1.40)、线性(R2＞0.99)和孔间变异度(95％可信区间为1.576％ ～3.334％)均优于药典方法,且实验周期由6d缩短为5d.5种显色方法对rhEGF供试品的检测结果差异无统计学意义(P＞0.05),CCK-8显色法检测结果的变异系数(CV)最小(16.8％),结晶紫显色法的CV值最大(23.3％).结论 优化方法更适用于rhEGF制品的常规生物学活性检测,且与其他4种显色方法等效.
重组人表皮生长因子、生物学活性测定、3T3细胞、显色方法
31
R392-33
中国食品药品检定研究院中青年发展研究基金2017B3
2018-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共5页
985-989
