一种肺炎链球菌重组蛋白PsaA-PspA23原核表达载体的构建及表达
目的 优化肺炎疫苗重组蛋白基因PsaA-PspA23的同源区序列,阻止该基因的组氨酸标签(His-tag)融合表达,对突变后的目的基因进行表达及鉴定.方法 以肺炎疫苗重组蛋白基因PsaA-PspA23为模板,设计2对具有重叠区的特异性引物,并分别对该重组基因进行扩增,得到PsaA-PspA2和PspA3的CDR区(亚类决定区)基因片段.利用重叠延伸PCR(Overlap PCR)技术,将PsaA-PspA2基因片段和PspA3的CDR区基因片段连接,得到同源区优化后的基因片段.利用PCR技术扩增同源区优化后的基因片段,使该基因3'末端引入终止密码子,阻止PsaA-PspA23基因表达载体上His-tag的融合表达.将得到的片段同源区优化且无His-tag融合表达的目的基因连接至pET20b载体后,转入大肠埃希菌(E.coli中进行表达,表达产物进行Western blot分析.结果 重组表达质粒pET20b-PsaA-PspA23经双酶切和测序鉴定,证明构建正确;转化E coli中,37℃,IPTG终浓度1 mmol/L诱导5h,获得可溶性表达的重组蛋白,且无His-tag.结论 PsaA-PspA23蛋白基因同源区优化及His-tag成功去除,并在原核表达系统E.coli中可溶性表达,可为PsaA-PspA23蛋白疫苗的进一步研究奠定基础.
组氨酸标签、肺炎链球菌表面蛋白A、同源区序列、重叠延伸PCR
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R378.1+4;Q789(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
2018-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
955-959,964
