聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子平均修饰度高效液相色谱蒸发光散射检测方法的建立及验证
目的 建立聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子(PEGylated recombinant human granulocyte colony-stimulating factor,PEG-rhG-CSF)平均修饰度的高效液相色谱蒸发光散射(high performance liquid chromatography coupled with evaporative light scattering detection,HPLC-ELSD)检测方法,并进行验证.方法 采用Jupiter 5u C4 300A色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以含0.1％三氟乙酸(TFA)的水溶液为A流动相,含0.1％ TFA的乙腈为B流动相,流速1 mL/min,在35℃柱温条件下经分段线性洗脱的方式分离样品,蒸发光散射检测器漂移管温度90℃,载气流速2.0 L/min,用外标法和双对数校正曲线定量溶液中的游离PEG含量.采用蛋白酶K消化去除PEG-rhG-CSF的蛋白部分后,经相同方法测定溶液中的总PEG含量,并计算结合PEG的含量和PEG的平均修饰度.对方法的专属性、线性、精密性、准确性进行验证,并确定检测限(LOD)和定量限(LOQ).结果 本实验建立的HPLC-ELSD法可将PEG与PEG-rhG-CSF及其他辅料成分有效分离;PEG在50 ～ 400 μg/mL范围内,上样量对数值与相应峰面积对数值之间呈良好的线性关系,拟合回归方程为:Y=1.969X+0.652,r2=0.999;精密性试验RSD为1.9％;LOD和LOQ分别为66和109 μg/mL;PEG的平均回收率为98.1％.结论 本实验建立的方法具有良好的专属性、精密度及准确性,可用于测定PEG-rhG-CSF的平均修饰度.
聚乙二醇、重组人粒细胞刺激因子、平均修饰度、高效液相色谱法、蒸发光散射检测
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O657.7+2;R392-33(分析化学)
国家科技重大专项课题2015ZX09501008-001
2018-08-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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