人C1酯酶抑制剂活性动态显色检测方法的建立及验证

摘要：

目的 建立人C1酯酶抑制剂(C1 esterase inhibitor or Cl inhibitor,C1-INH)活性的动态显色检测方法,并进行验证.方法 采用棋盘法分析C1酯酶与发色底物C1E 5603[CH30C-Lys(Cbo)-Gly-Arg-pNA· AcOH]反应后的A值变化率(△A/min),确定能使不同浓度酶饱和的最低底物浓度.将C1-INH浓缩制剂标准品与C1酯酶孵育,剩余的C1酯酶与底物C1E 5603作用产生A值,将△A/min与C1-INH活性进行拟合,绘制标准曲线.验证该方法的线性范围、选择性、特异性、准确度、精密度、稳定性,并进行样品添加试验.将验证后的该方法应用于C1-INH制备工艺过程样品的分析.结果 确定C1酯酶的浓度为28 μg/mL,底物浓度为2.4 mmol/L,反应结果监测4 min.C1-INH标准品在0.15～0.025 IU/mL范围内与△A/min呈良好的线性关系,R2≥0.99,校正标样回算浓度在标示值的90.2％～105.4％内;CM阳离子交换层析洗脱缓冲液、HIC疏水层析平衡缓冲液、人纤溶酶原(plasminogen,Plg)、人纤溶酶(plasmin,Plm)的响应值均低于定量下限响应的7.2％,并低于内标响应的2.7％;20 mmol/L以下的pH5.0NaAc及300 mmol/L以下的NaCl对C1-INH活性检测无影响;检测定量上限、高、中、低、定量下限质控样品,批内准确度在90.0％～114.8％之间,批内CV在0.7％～ 13.7％之间,批间准确度在94.2％～108.3％之间,批间CV在1.2％～9.7％之间;C1酯酶与底物C1E 5603室温放置3h不影响检测结果;样品添加试验回收率在94.5％～ 106.1％之间.CM阳离子交换层析洗脱液、DEAE阴离子交换层析洗脱液、HIC疏水层析流穿液中C1酯酶抑制剂的特异性活性逐渐升高,分别为0.79、1.84、2.61 IU/g.结论 本方法具有良好的选择性、准确度、精密度、特异性及稳定性,可作为C1-INH制备工艺中的内部控制指标.

关键词：C1酯酶抑制剂、动态显色法、活性

所属期刊栏目：31

分类号：R392-33

资助基金：2013年湖北省重大科技创新计划2013ACC001;武汉国际科技合作计划2015030809020360

在线出版日期：2018-08-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：751-757