生物反应器培养Vero细胞和H1N1流感病毒
目的 建立利用生物反应器制备Vero细胞流感H1NI全病毒灭活疫苗的新工艺.方法 利用Vero细胞作为流感病毒增殖的细胞基质,分别以无血清培养液Pro VERO和含血清DMEM培养液,利用5 g/L微载体cytodex-1在3L硅化生物反应器中进行培养,培养温度(37±0.5)℃,溶解氧(50±20)％,pH7.2±0.2,搅拌速度(50±20) r/min,待细胞在微载体上长成单层后,以0.1 MOI接种流感病毒Veto细胞高产适应株H1N1/JD/Va,将收获的病毒液经Sepharose 4FF和Capto Q两级纯化,灭活后制备疫苗原液及成品,按照《中国药典》三部(2015版)方法对其进行检定.结果 使用无血清细胞培养液培养Vero细胞24 h贴壁率约83％,含血清细胞培养液培养24 h贴壁率为112％;灌流培养方式培养至第6天时,细胞均长至单层,无血清细胞培养液最终细胞数达到(133.4±2.0)×104个/mL,含血清细胞培养液最终细胞数达到(353.4±5.9)×104个/mL.无血清病毒维持液培养,第66 h收获病毒液血凝效价为388,单位细胞产毒比例为2.9;含血清病毒维持液培养,第66 h收获病毒液血凝效价为891,单位细胞产毒比例为2.5.用含血清细胞培养液培养Vero细胞接种病毒,收获病毒液制备的疫苗原液及成品经检测,各项指标均符合《中国药典》三部(2015版)相关要求.结论 建立了3L生物反应器含血清细胞培养液培养Vero细胞和H1N1流感病毒的新工艺,为进一步放大生产规模奠定了基础.
生物反应器、Vero细胞、微载体、H1N1流感病毒
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R373.1+3;R392-33(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
北京协和医学院中国医学科学院重大协同创新项目创新工程四价流感病毒裂解疫苗2016-12M-1-019;北京协和医学院中国医学科学院医学与健康科技创新工程协同创新团队项目2016-12M-3-026;云南省科技创新人才计划项目中国医学科学院医学生物学研究所疫苗研发与新技术应用研究省创新团队项目2015HC027
2018-08-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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