十二指肠贾第虫α-6贾第素的原核表达及纯化
目的 原核表达并纯化十二指肠贾第虫α-6贾第素(α-6 Giardin).方法 以十二指肠贾第虫的cDNA为模板,PCR扩增α-6 Giardin基因片段,连接至pMD 18-T载体,得到重组克隆质粒pMD 18-T-α-6,将双酶切后得到的目的片段连接至pET-28a表达载体中,得到重组表达质粒pET-28a-α-6,转化至E coli Rosetta感受态细胞中,IPTG诱导表达目的蛋白α-6 Giardin,收集菌体,离心后进行SDS-PAGE及Western blot鉴定,并利用Ni-NTA亲和层析柱纯化融合的α-6 Giardin蛋白.结果 质粒pET-28a-α-6经双酶切鉴定,证明构建正确;表达的目的蛋白α-6Giardin为带His标签的包涵体蛋白,相对分子质量约40 000,可与鼠抗His单抗特异性结合,具有良好的反应原性;纯化的重组d-6Giardin融合蛋白相对分子质量约40 000,纯度可达80%.结论 成功克隆、表达并纯化了十二指肠贾第虫α-6Giardin蛋白,为十二指肠贾第虫α-6 Giardin进一步的功能研究奠定了基础.
十二指肠贾第虫、α-6贾第素、原核表达、纯化
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R382.2;Q786(医学寄生虫学)
国家白然科学基金项目31672288,30970322
2018-08-23(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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