核心链霉亲和素在毕赤酵母中的表达及纯化

摘要：

目的 构建核心链霉亲和素(core-streptavidin,CSA)酵母表达载体,表达、纯化CSA蛋白,并测定其活性.方法 通过基因操作获得天然SA的核心活性区域基因片段,克隆至酵母表达载体pPIC9K,重组表达质粒pPIC9K-CSA经电击转化至毕赤酵母KM71感受态细胞中,甲醇诱导表达CSA蛋白.利用硫酸铵沉淀、2-亚氨基生物素琼脂糖凝胶亲和层析法纯化CSA蛋白,紫外光谱测定法检测CSA蛋白与生物素的结合活性.结果 构建的CSA基因工程菌能有效表达目的蛋白,经硫酸铵沉淀、亲和层析两步法纯化后得到纯度约95％的CSA重组蛋白,其具有与生物素结合的活性,活性为13.6 U/mg.结论 利用毕赤酵母表达系统能够有效分泌表达CSA蛋白,该重组蛋白具有良好的生物学活性,为CSA发酵产品的大规模纯化提供了依据.

关键词：核心链霉亲和素、毕赤酵母、表达、纯化、活性

所属期刊栏目：31

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：陕西省科学院应用基础研究项目2014K-06

在线出版日期：2018-08-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：485-488