重组核酸酶原核表达载体的构建

摘要：

目的 构建重组核酸酶原核表达载体,并检测其表达情况.方法 根据GenBank公布的黏质沙雷菌胞外核酸酶(Serratia marcescens nuclease,SM nuclease)基因序列(M19495.1),去除其N-端信号肽序列,使用大肠埃希菌偏爱性密码子,设计并合成带有核酸酶基因的Ben-pGH.以核酸酶基因全长为模板,PCR法扩增该基因,将其与经Nco I和Xho I双酶切的A10-pET-32a-c(+)载体连接,连接产物转入E.coli Top10中,经菌液PCR筛选阳性克隆,并进行DNA测序.将Ben-pET-32a-c(+)转入E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE鉴定.结果 Ben-pET-32a-c(+)中核酸酶基因与GenBank公布的SM nuclease基因的同源性为82％.表达的重组核酸酶以包涵体形式存在,相对分子质量为30 000,表达量约占菌体总蛋白的84.45％.结论 成功构建了重组核酸酶原核表达载体,并获得稳定表达.

关键词：核酸酶、原核表达、质粒

所属期刊栏目：31

分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2018-08-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：467-472