牛传染性鼻气管炎病毒gE蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

摘要：

目的 制备牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheities virus,IBRV)gE蛋白的单克隆抗体,并进行鉴定.方法 将扩增的IBRV gE基因插入至载体pET-32a(+),转化感受态E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组蛋白IBRV gE,通过Ni-NTA Agarous Kit纯化后,免疫BALB/c小鼠.取免疫小鼠脾细胞,与SP2/0细胞融合,间接免疫荧光法筛选阳性杂交瘤细胞.经小鼠腹腔注射杂交瘤细胞,3×106个/只,待小鼠腹腔膨大后,采集腹水,硫酸铵沉淀法纯化单克隆抗体,并进行亚类、浓度、染色体数目、Western blot及间接免疫荧光检测.结果 重组蛋白IBRV gE相对分子质量约35 000,纯化后浓度为1.2 mg/mL.小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合后,筛选出1株稳定分泌IBRV单抗的杂交瘤细胞(命名为3G9),获得相应抗体浓度为1.46 mg/mL;为IgG1亚类,轻链为kappa链;染色体数目为95 ～ 105;可与IBRV发生特异性反应;可与接种IBRV毒株的MDBK细胞发生特异性结合,产生特异性荧光.结论 采用原核表达系统表达并纯化了IBRV gE蛋白,成功制备了抗IBRV gE的单克隆抗体,为建立特异性的IBRV诊断方法及致病机理的研究奠定了基础.

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒、gE蛋白、单克隆抗体

所属期刊栏目：31

分类号：S852.65+3;R392-33(动物医学（兽医学）)

资助基金：黑龙江省农垦总局攻关课题HNK125B-11-10A,HNK125B-11-08A

在线出版日期：2018-03-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：155-159