重组人源化抗CD52单克隆抗体相对抗原结合活性检测方法的建立及验证
目的 建立重组人源化抗CD52单克隆抗体相对抗原结合活性的检测方法,并进行验证.方法 测定3种人淋巴瘤细胞(MC/CAR、HUT78、RAMOS)CD52抗原的表达率,选择CD52表达率最高的作为靶细胞.以系列稀释的重组人源化抗CD52单克隆抗体的参比品和供试品作用表达CD52抗原的人淋巴瘤细胞,FITC标记的兔抗人IgG结合人淋巴瘤细胞上的重组人源化抗CD52单克隆抗体,流式细胞分析仪测定几何荧光均数.通过四参数方程拟合,计算参比品和供试品的半数有效浓度(EC50)及相对结合活性.并对该方法的专属性、准确性、精密性、线性范围和耐用性进行验证.结果 淋巴瘤MC/CAR细胞CD52抗原表达率最高,确定该细胞为靶细胞.CD52抗原与无关抗体不存在特异性结合;重复3次测定不同理论相对结合活性人源化抗CD52单克隆抗体参比品的回收率在97.4％～111.9％之间,相对结合活性及回收率的RSD值均在10％以内;同一实验人员于同一天6次重复检测重组人源化抗CD52单克隆抗体相对结合活性在86.93％ ～ 114.42％之间,RSD值在10％以内,3d内不同实验员分别检测5个效价样品的相对结合活性的RSD在20％以内;在重组人源化抗CD52单克隆抗体理论效价50％～150％范围内,与相对结合活性呈良好的线性,线性回归方程为y=1.0452x-1.082,R2为0.992 1;MC/CAR细胞在第28代时仍适用于抗CD52抗体相对结合活性的测定.结论 该方法具有良好的特异性、准确性、精密性、线性和耐用性,且操作简便,可用于重组抗CD52抗体抗原结合活性的常规检测.
重组人源化抗CD52单克隆抗体、抗原结合活性、间接免疫荧光法、淋巴瘤细胞
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R392-33
甘肃省科技重大专项1502FKDA008
2018-03-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
67-72,76
