猪弓形虫循环抗原双抗体夹心ELISA检测方法的建立及应用
目的 建立一种检测猪血清中弓形虫循环抗原(circulating antigen,CAg)的双抗体夹心ELISA法.方法 利用抗弓形虫表面抗原3(surface antigen 3,SAG3)的单克隆抗体Anti-A-SAG3-7作为捕获抗体,辣根过氧化物酶(HRP)标记抗弓形虫SAG3的单克隆抗体Anti-A-SAG3-23作为检测抗体,建立双抗体夹心ELISA法,并对方法的捕获抗体(1∶400～1∶6400倍比稀释)、检测抗体(1∶400～1∶12800倍比稀释)、血清稀释度(1∶10～1∶80倍比稀释)及封闭液的种类(5％脱脂奶粉、10％胎牛血清、5％ BSA、1％ BSA)进行优化,同时验证该方法的敏感性、特异性及精密性.采用优化后的方法对广东和吉林地区的各94份猪血清样本进行检测.结果 双抗体夹心ELISA法的最佳检测条件为:捕获抗体Anti-A-SAG3-7及检测抗体HRP-Anti-A-SAG3-23稀释度均为1∶3200,封闭液为1％ BSA,血清稀释度为1∶80.该方法检测两份猪囊虫阳性血清无交叉反应,灵敏度达1∶640,批内及批间的变异系数(CV)均＜11％.广东和吉林地区各94份样品的阳性率分别为20.2％(19/94)和11.7％(11/94).结论 该方法具有良好的特异性、敏感性及精密性,可用于猪弓形虫CAg的检测.
弓形虫、循环抗原、表面抗原、双抗体夹心ELISA
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R382.5;R392-33(医学寄生虫学)
吉林省科技发展计划项目20130206023NY;国家公益性行业农业科研专项201303042
2018-03-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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