重组人源化抗人类表皮生长因子受体2单克隆抗体酸性电荷异构体质量评价
目的 比较抗人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)单克隆抗体酸性电荷异构体、原液及纯化工艺中阳离子交换层析预洗脱杂质质量差异,为细胞培养工艺研究和纯化工艺参数的调整提供参考.方法 采用体积排阻色谱法(size exclusion chromatography,SEC)检测供试品单体、聚体和残体含量;非还原/还原毛细管电泳-十二烷基磺酸钠(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfate,CE-SDS)法检测供试品电泳纯度;弱阳离子交换色谱法(weak cation exchange chromatography,CEX)检测供试品电荷异构体分布;毛细管等电聚焦(capillary iso-electric focusing,cIEF)法测定供试品等电点;细胞增殖抑制法测定供试品生物学活性.结果 SEC检测结果显示,预洗脱杂质、酸性异构体和原液的单体含量分别为54.44％、99.08％和99.80％,残体含量分别为44.33％、0.61％和0.非还原CE-SDS结果显示,预洗脱杂质、酸性异构体和原液的主峰含量分别为53.93％、90.83％和95.83％,小分子杂质含量分别为46.07％、9.17％和4.17％;还原CE-SDS结果显示,预洗脱杂质、酸性异构体和原液的轻、重链百分含量分别为78.00％、96.80％和98.85％.CEX检测结果显示,预洗脱杂质、酸性异构体和原液的主峰含量分别为2.60％、16.77％和66.46％,酸性峰含量分别为97.40％、82.53％和25.92％.cIEF检测结果显示,预洗脱杂质、酸性异构体和原液的主峰含量分别为3.21％、18.17％和33.20％,酸性峰含量分别为94.21％、80.18％和64.38％,pI范围分别为6.40 ～8.85、7.69 ～ 8.69和7.94～ 8.69.生物活性测定结果显示,预洗脱杂质、酸性异构体和原液的比活性分别为0.45×104、1.02×104和0.94× 104U/mg.结论 HER2单克隆抗体酸性组分大部分由于单克隆抗体片段化造成;酸性电荷异构体的存在对HER2单克隆抗体的活性影响并不显著.
人类表皮生长因子受体2、单克隆抗体、酸性电荷异构体
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R392-33
2018-03-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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