牛乳腺炎无乳链球菌PI-2a菌毛岛屿辅助蛋白BP、AP2主要抗原域的串联表达及其免疫活性
目的 构建无乳链球菌(group B Streptococcus agalactea,GBS)菌毛岛屿辅助蛋白BP、AP2主要抗原表位域融合表达重组质粒,进行高效表达,并分析其免疫活性.方法 利用DNAstar生物信息软件Protean功能筛选BP和AP2主要抗原表位域,并引入15位柔性多肽,通过重叠延伸PCR技术扩增融合BP、AP2主要抗原表位域基因,PCR扩增串联体基因片段,克隆至原核表达载体pET-30a(+),构建重组表达质粒pET-30a(+)/BP+ AP2,转化至大肠埃希菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达.表达的融合蛋白BP+ AP2经亲和层析纯化后,进行Western blot鉴定,并免疫昆明小白鼠,检测其免疫原性.结果 PCR扩增出675 bp的BP和759 bp的AP2主要抗原域,经重叠延伸PCR获得了1 380 bp的BP、AP2串联体基因片段,DNA测序结果表明,无碱基的缺失、突变和移码.构建的重组表达质粒经诱导后获得表达,目的蛋白相对分子质量约55 000,主要以包涵体形式存在,纯化后纯度达96％以上,浓度为2.05 mg/ml.纯化的融合蛋白能被兔抗GBS阳性血清所识别,且具有良好的免疫原性.结论 构建了GBS BP、AP2主要抗原表位域串联体重组表达质粒pET-30a(+)/BP+ AP2,表达产物具有良好的免疫活性,为进一步研究基于BP、AP2蛋白的致病机制、诊断制剂及基因工程疫苗奠定了基础.
无乳链球菌、菌毛岛屿、BP、AP2、串联表达、免疫活性
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S852.61+1(动物医学（兽医学）)
国家自然科学基金项目31560689;内蒙古自治区乳源性致病菌防控工程技术研究中心开放课题MDK2016037,MDK2016036,MDK2017016;内蒙古自治区科技厅计划项目2017;内蒙古自治区“草原英才”创新团队项目
2017-12-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
1140-1145,1149
