牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

摘要：

目的 制备牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)gD蛋白单克隆抗体,并进行鉴定.方法 将扩增的IBRV gD基因插入原核表达载体pET-28a(+),构建重组质粒gD-pET-28a,转化至感受态E.coli BL21(DE3),经IPrG诱导表达重组蛋白gD,通过Ni-NTA Agarous Kit纯化后,免疫BALB/c小鼠.取小鼠脾细胞,与SP2/0细胞融合,筛选阳性杂交瘤细胞,经小鼠腹腔注射,待小鼠腹腔膨胀时抽取腹水,用HiTrap Protein GHP试剂盒纯化单抗,进行Western blot及间接免疫荧光检测.结果 重组蛋白gD相对分子质量为48 000,纯化后浓度为4.19 mg/ml.小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合后筛选出1株阳性杂交瘤细胞株,获得相应单克隆抗体的蛋白含量为1.81 mg/ml,且可与IBRV发生特异性反应,可与接种IBRV的MDBK细胞发生反应,产生特异性荧光.结论 本研究利用原核表达系统表达纯化了IBRV gD蛋白,成功制备了IBRV gD单克隆抗体,为下一步表位鉴定及致病机理的研究奠定了基础.

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒、gD蛋白、单克隆抗体

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分类号：S852.65+3;R392-33(动物医学（兽医学）)

资助基金：黑龙江省农垦总局攻关课题HNK125B-11-10A,HNK125B-11-08A

在线出版日期：2017-11-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1050-1054