牛副流感病毒3型TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法的建立
目的 建立检测牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)的TaqMan荧光定量PCR方法.方法 根据GenBank中公布的BPIV3序列,选取P基因上保守区域设计特异性引物及TaqMan-MGB探针.优化反应体系,建立实时荧光定量PCR方法,并对方法的特异性、重复性和敏感性进行验证.结果 标准曲线在104～108 copies/μl范围内具有良好的线性关系,R2达到0.999,斜率为-3.203,扩增效率为105.2％.利用该方法对BPIV3a及BPIV3c进行检测,结果为阳性,对牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)、牛传染性鼻气管炎病毒(infectioils bovine rhinotraeheitis virus,IBRV)进行检测,结果呈阴性.3个浓度质粒标准品,重复3次检测,CV均小于1.5％.建立的方法对质粒的最小检出量为1.0×102 copies/μl.结论 建立了能够检测BPIV3a及BPIV3c的TaqMan-MGB探针实时定量PCR方法,该方法特异性较强,重复性及敏感性良好,为早期诊断及定量分析提供了更快速、稳定、可靠的方法.
牛副流感病毒3型、TaqMan-MGB探针、荧光定量PCR
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S852.65+3;Q789(动物医学（兽医学）)
黑龙江省农垦总局攻关课题HNK125B-11-08A;“十二五”农村领域国家科技计划课题2012BAD12B03-3;黑龙江八一农垦大学研究生创新科研项目YJSCX2016-Y27
2017-09-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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