小反刍兽疫病毒N蛋白的原核表达、纯化及其抗体间接ELISA检测方法的建立
目的 原核表达小反刍兽疫病毒(Peste des petits of ruminants virus,PPRV)N蛋白,纯化后建立其抗体间接ELISA检测方法.方法 人工合成PPRV N蛋白基因序列,并构建重组质粒pSumo-mut-N,转化至大肠埃希菌Arctic Express中,IPTG诱导表达,并对IPTG浓度和诱导时间进行优化.表达的融合蛋白经Ni柱亲和层析纯化后,以其作为包被抗原建立PPRV抗体间接ELISA检测方法,对临床样本进行检测.结果 重组表达质粒pSumo-mut-N经双酶切和测序证明构建正确.N蛋白最佳诱导表达条件为0.5 mmol/L IPTG于11℃诱导10 h.表达的重组蛋白相对分子质量约71 900,纯化后纯度在80％以上,浓度可达120 μg/ml,与PPRV阳性抗体具有良好的反应原性.基于N蛋白建立的PPRV抗体间接ELISA方法样品检测结果与已知血清之间的符合率为100％.结论 原核表达并纯化了PPRV N蛋白,建立的基于N蛋白的PPRV抗体ELISA检测方法为PPRV抗体间接ELISA检测试剂盒的研制和应用奠定了基础,对于流行病学免疫监测及控制PPRV的流行具有重要意义.
小反刍兽疫病毒、N蛋白、原核表达、抗体检测、酶联免疫吸附测定
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S852.65+3;R392-33(动物医学（兽医学）)
农业公益性行业项目:新型动物疾病诊断技术应用研究201203056
2017-09-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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