腺病毒抗原表位嵌合蛋白的原核表达及其免疫原性
目的 设计含有人腺病毒(human adenovirus,HAdV)3、7、11、14及55型抗原表位的嵌合蛋白,利用大肠埃希菌进行原核表达,并检测其抗原性及免疫原性.方法 对5种型别HAdV的六邻体蛋白氨基酸序列进行分析,筛选出其中具有强抗原性的片段,片段之间用2个甘氨酸和1个丝氨酸进行连接,形成1个多抗原片段串联的嵌合蛋白.优化嵌合蛋白的基因序列并化学合成全长基因,克隆至原核表达载体pET28a(+)中,转化大肠埃希菌BL21(DE3),筛选高表达嵌合蛋白的工程菌.用High Affinity Ni-NTA resin纯化该嵌合蛋白,并将其作为免疫原免疫BALB/c小鼠,制备抗血清,间接ELISA法检测嵌合蛋白的抗原性及免疫原性.结果 成功构建了高表达嵌合蛋白的工程菌,表达的嵌合蛋白相对分子质量约55 000,表达量达95％;破菌上清中嵌合蛋白的纯度较高,纯化后纯度在90％以上.嵌合蛋白免疫小鼠4次后,小鼠抗血清效价达1∶320 000.制备的腺病毒抗原表位嵌合蛋白能有效检测血清中腺病毒3、7、1 1、14及55型抗体,且能有效刺激机体产生针对各型别腺病毒抗原表位的抗体.结论 表达制备的包含5种型别HAdV抗原表位的嵌合蛋白具有较好的抗原性及免疫原性,为进一步研制腺病毒疫苗、单克隆抗体及诊断试剂奠定了基础.
人腺病毒、抗原表位、嵌合蛋白、抗原性、免疫原性
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R373.9;R392-33(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
“国家重大新药创制课题2015ZX09J15105-001-003
2017-08-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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