人T-bet和HBV-L共表达质粒的构建及体外表达

摘要：

目的 构建人转录因子T-bet基因与乙肝病毒表面抗原大蛋白全长基因(hepatitis B virus surface antigen large protein,HBV-L)的共表达载体,并检测其在体外的表达.方法 利用PCR及基因重组技术,以人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)的cDNA为模板,扩增获得人T-bet全长基因,以含有HBV-L的质粒pcDNA3.1-HBV-L为模板,扩增获得HBV-L基因,将上述2个基因克隆至真核表达质粒pIRES中,获得共表达质粒pIRES-T-bet-HBV-L.将该质粒转染293T细胞,经RT-PCR、ELISA和细胞免疫荧光试验检测其在真核细胞中的表达.结果 限制性酶谱分析及测序证实重组质粒pIRES-T-bet-HBV-L构建成功;该质粒在体外转染293T细胞后,可表达T-bet与HBV-L两者的mRNA;细胞免疫荧光试验和ELISA检测结果证实,该质粒转染293T细胞后可表达T-bet和HBV-L蛋白.结论 成功构建了共表达质粒pIRES-T-bet-HBV-L,该质粒能在293T细胞中表达.

关键词：人T-bet基因、乙肝表面抗原大蛋白全长基因、DNA疫苗

所属期刊栏目：30

分类号：R373.2+1;Q786(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2017-07-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：582-586