白细胞介素-7基因慢病毒表达载体的构建及在CHO-K1细胞中的稳定表达
目的 构建白细胞介素-7(interleukin-7,IL-7)基因慢病毒表达载体,并在CHO-K1细胞中稳定表达,为生产试剂级的IL-7奠定基础.方法 参照GenBank中公布的人IL-7基因核苷酸序列(J04156.1),人工合成该条基因,亚克隆至表达载体pLV-CMV-EF1-GP上,构建重组慢病毒表达质粒pLV-CMV-EF1-GP-rIL-7,在HEK293T细胞中进行病毒包装,检测病毒滴度后,收获细胞毒液,感染CHO-Kl细胞,经嘌呤霉素筛选,获得稳定表达IL-7的CHO-KI-rIL-7细胞.荧光显微镜观察感染细胞绿色荧光蛋白的表达;RT-PCR法检测IL-7基因mRNA的转录;EHSA法检测IL-7的含量;Western blot法检测I1-7的表达.结果 重组慢病毒表达质粒pLV-CMV-EF1-GP-rIL-7经双酶切及测序结果证明构建正确.慢病毒的滴度为3×108 TU/ml.慢病毒感染CHO-K1细胞24、48和72 h后,均可见特异性绿色荧光蛋白表达,且随着培养时间的延长,荧光强度明显增强;CHO-K1-rIL-7细胞可扩增出约540 bp的IL-7基因片段;经ELISA检测,样品中IL-7含量为0.6ng/ml;表达产物主要存在于CHO-K1-dL-7细胞上清中,且具有良好的反应原性.结论 成功构建了IL-7基因慢病毒重组表达质粒,并实现了IL-7在CHO-K1细胞上的稳定表达.
白细胞介素-7、慢病毒、CHO-K1细胞、稳定表达
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R392.11;Q782
教育部“长江学者和创新团队发展计划”项目IRT13091;西北民族大学中央高校基本科研业务费专项资金资助项目31920150075;西北民族大学中央高校基本科研业务费专项资金资助研究生项目Yxm2015205
2017-07-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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