重组人复合干扰素的定点诱变及PEG化修饰

摘要：

目的 将复合干扰素(consensus interferon,cIFN)76位点丙氨酸(Ala)突变为半胱氨酸(Cys),以期获得一种高效和可供聚乙二醇马来酰亚胺(PEG-MAL)定点修饰的IFN突变体分子.方法 采用同源序列对比、空间结构模拟并结合IFNα与受体结合的特点设计突变位点.通过基因工程方法获得cIFNm76工程菌,IPTG诱导表达,所得包涵体经变复性、DEAE阴离子及CM阳离子两步交换层析纯化后,采用SDS-PAGE和高效液相色谱法(HPLC)检测cIFNm76的纯度;细胞病变抑制法检测其体外抗病毒活性;REFLEXTMⅢ基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF-MS)测定其相对分子质量;SDS-PAGE分析cIFNm76与PEG-MAL的交联反应;并进行N-末端、C-末端序列测定及紫外光谱扫描.结果 cIFNm76以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的30％以上,纯度大于95％,比活性约为1.08×108 IU/mg,N-末端、C-末端氨基酸序列与理论一致,相对分子质量经MALDI-TOF-MS测定为19 500,紫外特征吸收波长为280 nm,与PEG-MAL成功交联.结论 成功获得一种高效和可供PEG-MAL定点修饰的cIFNm76,解决了现有PEG定点修饰技术存在的问题.

关键词：复合干扰素、定点诱变、聚乙二醇修饰

所属期刊栏目：30

分类号：Q511(蛋白质)

资助基金：国家自然科学基金81202438

在线出版日期：2017-05-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：424-428