真核重组表达质粒pTT5-CTP-PTEN的构建及其在HEK293-6E细胞中的表达

摘要：

目的 构建真核重组表达质粒pTT5-CTP-PTEN,并在HEK 293-6E细胞中进行表达.方法 合成融合基因CTP-PTEN,定向克隆至真核表达载体pTT5中,构建重组表达质粒pTT5-CTP-PTEN,转化感受态E.coli DH5α,提取质粒,进行双酶切及测序鉴定.在Lipofectamine 2000的介导下,将鉴定正确的重组表达质粒转染至HEK 293-6E细胞,Western blot法检测细胞中融合蛋白CTP-PTEN的表达.结果 经双酶切及测序鉴定,证明重组表达质粒pTT5-CTP-PTEN构建正确.转染48 h后,HEK 293-6E细胞中可见相对分子质量约49 700的CTP-PTEN融合蛋白条带.结论 成功构建了重组质粒pTT5-CTP-PTEN,并于HEK 293-6E细胞中表达了CTP-PTEN融合蛋白.

关键词：PTEN基因、胞浆转导肽、基因表达、真核细胞、HEK 293-6E细胞

所属期刊栏目：30

分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

资助基金：成都市医学科研课题2014001;成都学院校青年基金项目2014XJZ08;成都大学附属医院院内课题2014016

在线出版日期：2017-05-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：377-380