人血管内皮生长因子189在毕赤酵母中的表达、纯化及其活性

摘要：

目的 在毕赤酵母中表达人血管内皮生长因子189 (vascular endothelial growth factor 189,VEGF 189),并进行纯化,同时检测其在体外的生物活性.方法 以人VEGF183为模板,经重叠PCR法获得VEGF189基因,亚克隆至pPIC9K中,获得重组表达质粒pPIC9K-VEGF 189.将其转化至E.coli DH5α中进行扩增,提取质粒,用Sac Ⅰ酶线性化,电转至毕赤酵母GSll5中,经4mg/ml G418-YPD平板筛选高拷贝克隆.采用甲醇进行诱导表达,并通过肝素琼脂糖树脂亲和层析进行纯化.血管通透性试验检测其生物活性.结果 经PCR鉴定证明重组表达质粒pPIC9K-VEGF189构建正确.VEGF189蛋白的表达及纯化产物均可与兔抗人VEGF183多克隆抗体发生特异性结合,纯化蛋白纯度达95％以上,浓度为0.2911 mg/ml,可增加血管的通透性.结论 本实验通过酵母表达系统获得了具有活性的VEGF189蛋白,为在体外探讨该蛋白在血管生成中的作用奠定了基础.

关键词：人血管内皮生长因子189、毕氏酵母、纯化、血管通透性试验、生物学活性

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分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：河南省重大科技专项研究课题161100310900;河南省科技厅基础前沿项目142300410027;河南省教育厅12B320021

在线出版日期：2017-05-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：346-350