无血清培养Vero细胞及其传代稳定性分析
目的 建立无血清无动物源性培养基(virus production-serum-free medium,VP-SFM)培养Vero细胞的工艺,并分析其传代稳定性.方法 采用VP-SFM适应培养Vero细胞,建立无血清无动物源性Vero细胞库,对细胞库进行常规检定;绘制VP-SFM培养Vero细胞的生长曲线;比较140、150、160代Vero细胞在VP-SFM中培养的比生长速率(μ)和分裂次数(Cd);比较142、147、153代Vero细胞在VP-SFM中培养的狂犬病病毒滴度;比较无血清与含血清培养140、150、160代Vero细胞的μ和Cd值;分别在250 ml spinner flask中加入2 g/L cytodex Ⅰ、在3L生物反应器中加入3 g/L cytodex Ⅰ培养Vero细胞,观察细胞贴壁和生长情况.结果 建立的无血清无动物源性Vero细胞库,细胞密度为4× 106个/ml,冻存前细胞活率为100％,复苏后细胞平均活率为(94.20±3.95)％,无菌检查和支原体检查合格;细胞在VP-SFM中复苏传代后生长良好,经过24 h潜伏期后,进入对数生长期,第8天进入平台期,第12天达最大细胞密度20.5× 105个/ml,并维持至第14天,活细胞数开始下降,最大μ值为0.025 4 h-1.Vero细胞在无血清培养基中传代稳定性较好,140、150、160代Vero细胞在VP-SFM培养的μ和Cd值差异无统计学意义(P＞O.05);142、147、153代Vero细胞在VP-SFM培养的狂犬病病毒滴度差异无统计学意义(P＞0.05);140、150、160代Vero细胞在无血清和含血清培养基培养的μ和Cd值差异无统计学意义(P＞0.05).在生物反应器微载体系统中,采用无血清培养基培养Vero细胞,细胞贴壁及生长状态良好.结论 初步建立无血清、无动物源性物质的Vero细胞库,采用方瓶静置培养或微载体搅拌培养,细胞生长状态均良好,传代稳定性也较好.
无血清无动物源性培养基、Vero细胞、传代稳定性
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R392-33
甘肃省战略性新兴产业创新支撑专项计课题[甘财建2014111号].
2017-03-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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