恶性疟原虫合子/动合子表面25蛋白ELISA定量检测方法的建立及其应用

摘要：

目的 建立恶性疟原虫合子/动合子表面25蛋白(25 KDa Plasmodiumfalciparum sexual stage protein,Pfs25)的ELISA定量检测方法.方法 以双抗体夹心ELISA法为基础,建立Pfs25蛋白的ELISA定量检测方法,并对该方法进行重复性和准确性验证.用建立的方法检测不同重组菌株、CHO细胞中,以及经10L发酵罐培养菌株纯化各阶段样品中Pfs25蛋白的表达量.结果 建立的方法线性范围为0～1.6 μg/ml,R2=0.984,检测灵敏度为0.032 μg/ml,回收率为81％～119.0％,CV＜ 15％.Pfs25-Pet42a/DE3表达后的Pfs25蛋白浓度在2.03 ～7.26μg/ml;Pfs25-pGAPZαA/GS115、Pfs25-pPICZαA/GS 115和(α-Pfs25) 8-pAO815/GS 115表达后的Pfs25蛋白浓度分别为113、105和280 μg/ml;3株Pfs25/CHO细胞表达的Pfs25蛋白浓度分别为106.11、116.89和155.01 μg/ml.pPICZαA-Pfs25/GS 115菌株发酵液中,Pfs25蛋白的增加呈先快后慢的趋势,72 h后,目的蛋白增加逐渐平缓;纯化洗脱液3个峰中Pfs25蛋白浓度分别为22.67、42.12和55.27 μg/ml,流穿液中Pfs25蛋白浓度仅为0.096 μg/ml.结论 建立的Pfs25蛋白ELISA定量检测方法可用于疟疾疫苗研究中Pfs25蛋白的定量分析.

关键词：恶性疟原虫合子/动合子表面25蛋白、蛋白含量、酶联免疫吸附测定

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分类号：R382.3+1;R392-33(医学寄生虫学)

资助基金：2014年甘肃省自然科学基金145RJZA231.

在线出版日期：2017-01-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1333-1336,1340