重组人睫状神经营养因子纯化工艺的建立
目的 建立适于生产应用的重组人睫状神经营养因子(recombinant human ciliary neurotrophic factor,rhCNTF)纯化工艺,并对纯化产物进行鉴定.方法 将CNTFnewCC22突变体工程菌BL21(DE3)菌体破碎上清经25％饱和度硫酸铵沉淀后,沉淀上清先后经Butyl HP疏水层析和Q HP阴离子交换层析进行纯化.通过非还原SDS-PAGE和反相高效液相色谱分析(RP-HPLC)检测样品纯度;质谱法测定rhCNTF的相对分子质量;Edman化学降解法测定rhCNTF的N-端氨基酸序列;TF-1细胞/CCK-8比色法和对饮食诱导性肥胖(diet-induced obesity,DDIO)大鼠的减肥作用分别测定rhCNTF的体外和体内生物学活性.结果 纯化后rhCNTF的纯度可达99.6％,纯化回收率为34.5％;相对分子质量为21 153;N-端15个氨基酸序列为Ala-Phe-Thr-Glu-His-Ser-Pro-Leu-Thr-Pro-His-Arg-Arg-Asp-Leu;生物学比活性高于2×106 IU/mg,并能有效降低DIO大鼠体重.结论 经3步纯化成功获得了高纯度的rhCNTF,为进一步对其性质、功能和生产应用研究奠定了基础.
重组人睫状神经营养因子、纯化、大肠埃希菌、减肥
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R977.6;R392-3(药品)
北京市科委“生物医药与生命科学创新培育研究一创新品种临床前研究专项”z151100003915068;国药集团新产品开发基金2011SW02.
2017-01-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1321-1327
