A型产气荚膜梭菌α毒素疫苗抗原rCPA-HSP65的原核表达及其纯化

摘要：

目的 原核表达A型产气荚膜梭菌α毒素疫苗抗原rCPA-HSP65,并进行纯化.方法 以CPA全基因为模板,PCR扩增rCPA基因,插入表达质粒pET-28a(+)-HSP65,构建重组表达质粒pET-28a-rCPA-HSP65,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物进行12％ SDS-PAGE分析;优化表达工艺进行高密度发酵,发酵产物经DEAE阴离子柱上复性后,再经金属螯合层析纯化.结果 重组表达质粒pET-28a-rCPA-HSP65经双酶切及测序鉴定证明构建正确,表达的重组蛋白相对分子质量约90 000,主要以可溶性形式为主,表达量占菌体总蛋白的30.17％.利用TB培养基,IPTG 34℃诱导5h的表达产物经纯化后,纯度约达95％,蛋白收率为4.5mg/g湿菌.结论 已成功表达并纯化了A型产气荚膜梭菌α毒素疫苗抗原rCPA-HSP65,为后期疫苗生物学活性的研究奠定了基础.

关键词：A型产气荚膜梭菌α毒素、rCPA-HSP65、原核细胞、基因表达、高密度发酵、蛋白纯化

所属期刊栏目：29

分类号：R378.8+2;Q786(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2017-01-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1267-1270