基于吲哚胺2,3-双加氧酶1活性评价人间充质干细胞免疫调控功能的吸光光度法的建立及优化
目的 建立一种基于吲哚胺2,3-双加氧酶1(indoleamine 2,3-dioxygenase 1,IDO1)的活性快速评价人间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)免疫调控功能的吸光光度法,并进行优化.方法 以含干扰素γ(interferon γ,IFNγ)的完全培养基激活hMSCs,收集hMSCs培养上清,与三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)和对二甲氨基苯甲醛(paradimethylaminobenzaldehyde,PDAB)反应,检测A492值,通过标准曲线计算样品中色氨酸代谢产物犬尿氨酸(kynurenine)的含量,以反映hMSCs所分泌IDO1的酶代谢活性,并对方法中的培养体系(6、12、24、48、96孔板)、IFNγ处理时间(4、8、12、24 h)、培养基使用量(150、200、250、300、350、400、450及500μl)及IFNγ作用浓度(0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、5.0及10.0 ng/ml)进行优化.同时验证方法的特异性,并检测样品保存条件及液氮冻存后不同复苏时间对kynurenine浓度的影响.采用优化后的方法分析不同来源、不同代次的hMSCs分泌IDO1的能力.结果 确定最佳检测条件为:培养体系为48孔体系,IFNγ处理时间为24 h,培养基使用体积为200μl,IFNγ作用浓度为10.0 ng/ml.该方法可特异性检测IDO1的活性;除常温外,其他样品保存条件对检测结果影响较小;液氮冻存后复苏24 h可检测到与冻存前水平相当的kynurenine.该方法可有效判断不同供体来源的hMSCs在分泌IDO1功能上的差异.结论 该方法可快速、特异、稳定地检测hMSCs分泌IDO1的水平,且操作简便,可用于快速评价hMSCs的免疫调控功能.
吲哚胺2、3-双加氧酶1、间充质干细胞、免疫调控功能、吸光光度法、犬尿氨酸
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R392.12
国家自然科学基金面上项目81172102;中国科学院干细胞与再生医学研究战略性先导科技专项XDA01030508;国家重点研发计划2016YFA0101501.
2016-10-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
954-960
