a型流感嗜血杆菌结合物游离多糖含量测定方法的建立及验证
目的 建立a型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type a,Hia)结合物游离多糖含量测定方法,并对方法进行验证.方法 利用脱氧胆酸钠(NaDC)盐酸法和蒽酮硫酸法测定Hia结合物的游离多糖含量.通过检测NaDC盐酸法沉淀破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)、TT ADH衍生物(ADH derivative of TT,TTTAH)及TT琥珀酰化衍生物(succinic anhydride derivative of TT,TTSA)的最大能力以及沉淀多糖降解物(depolymerized polysaccharide,de-PS)或降解多糖ADH衍生物(ADH derivative of de-PS,de-PSAH)与相应载体蛋白质混合物的最佳离子强度,并利用最佳离子强度检测混合物中多糖与蛋白质质量的最小比例,以确定Hia结合物游离多糖含量的测定条件.通过添加回收试验验证方法的准确度,多次测定结合物的游离多糖含量验证方法的精密度.结果 NaDC盐酸法对蒽酮硫酸法测定多糖含量几乎无影响;NaDC盐酸法沉淀TT、TTAH和TTSA的最大能力分别为402.8、352.5和691.0 μg/ml;在0.6 mol/L NaCl的离子强度下,NaDC盐酸法沉淀多糖与蛋白质混合物,当de-PS与TT或TTAH的质量比≥1:2、de-PSAH与TT的质量比≥1:4、de-PSAH与TTSA的质量比≥1:5时,多糖回收率均在95％以上.向结合物添加6、12、35和56μg/ml的de-PS或de-PSAH时,多糖回收率均在80％～100％之间;游离多糖含量检测结果的CV值均在10％以内.结论 建立的方法适用于不同结合方法制备的Hia结合物游离多糖含量的测定.
a型流感嗜血杆菌、多糖蛋白质结合物、脱氧胆酸钠、游离多糖
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R378.4+1;O656.35(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
2016-07-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
623-627,631
