副流感病毒5型CC-14株辅助质粒的构建及鉴定

摘要：

目的 构建副流感病毒5型(parainfluenza virus 5,PIV5)CC-14株核衣壳蛋白(nucleoprotein,NP)、磷蛋白(phosphoprotein,P)和聚合酶蛋白(large protein,L)基因真核表达质粒,并在MDCK细胞中表达,为该病毒反向遗传系统的建立奠定基础.方法 根据PIV5 CC-14株全基因组中的NP、P和L基因分别设计特异性引物,经RT-PCR扩增得到NP、P和L基因,酶切后分别连接至pcDNA3.1+真核表达载体(或pMD18-T)上,构建辅助质粒pcDNA3.I-NP、pcDNA3.1-P和pcDNA3.I-L,转染MDCK细胞,RT-PCR检测NP、P和DL基因的转录情况.结果 经双酶切及测序鉴定证明辅助质粒pcDNA3.1-NP、pcDNA3.1-P和pcDNA3.1-L构建正确,3个质粒转染MDCK细胞后,经RT-PCR分别可扩增得到NP、P和DL基因片段.结论 成功构建了PIV5 CC-14株pcDNA3.1-NP、pcDNA3.1-P和pcDNA3.1-L辅助质粒,且均可在MDCK细胞中有效转录,为该病毒反向遗传系统的建立奠定了基础.

关键词：副流感病毒5型、核衣壳蛋白、磷蛋白、聚合酶蛋白、辅助质粒、MDCK细胞

所属期刊栏目：29

分类号：R373.1+3;Q782(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2016-07-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：588-591